脱脂奶粉含有牛奶中的多种蛋白质，如乳清蛋白和酪蛋白，是最常见的封闭剂之一。脱脂奶粉价格低廉

、易制备，但需要在使用前应进行过滤以防止微粒与膜结合造成“斑点”背景
。

由于牛奶中含有磷酸化的酪蛋白，可被抗磷酸化酪氨酸的抗体识别，导致抗体的非特异性结合进而形成高背景结果，因此在检测磷酸化蛋白时
，不建议使用脱脂奶粉。此外使用含有生物素（Biotin）的检测体系时，也不能使用牛奶
，因为牛奶也中存在Biotin

。

常规实验操作是用5% NFDM进行封闭，但当待测蛋白的丰度较低时，高浓度的牛奶会封闭某些抗原表位

，让本就微弱的结果消失殆尽。因此
，713贵宾会检测线路建议此时从较低浓度的脱脂奶粉封闭液开始进行封闭条件摸索（如1% m/v）。

BSA来源于奶牛血清，与牛奶类似，是一种很好的通用封闭剂且易于在实验室中制备。与含牛奶的缓冲液类似，BSA溶液在使用前应进行过滤以去除颗粒
，防止“斑点”背景产生。

在检测磷酸化蛋白时
，BSA 通常优于牛奶，且用其稀释配制的抗体工作液不易变性
，可以重复使用。BSA 的工作浓度通常为 0.3-5%，其中以3%的浓度最为常见。

血清（Serum）

血清通常来源于马或胎牛，价格比牛奶和BSA更高，不常用作封闭剂
。全血清含有多种蛋白质，免疫组化实验中作为封闭剂使用的血清浓度一般为10% m/v。

全血清含有免疫球蛋白，可能与一抗或二抗发生交叉反应导致非特异性背景
。但在与样本物种差异比较大的情况下，血清作为封闭剂的效果仍然较为优秀。

鱼胶（Fish Gelatin）

鱼胶蛋白更常用于免疫组织化学，在WB实验中，2%鱼胶蛋白可用作封闭剂。鱼胶相比BSA和牛奶，不会与哺乳动物蛋白质发生交叉反应。由于鱼胶含有内源性生物素，它不能与Biotin检测系统一起使用。

713贵宾会检测线路生物快速封闭试剂的优点

1. 鱼胶蛋白为小分子多肽，相比于大分子蛋白，与转印膜结合效果效果好、封闭效率更高
   ，可有效降低因封闭不足导致的高背景
   ；

2. 提高信噪比
   ，增强抗体信号，为抗原-抗体结合提供了绝佳的反应环境，能节约抗体使用
   ；

3. 预混TBST，加入蒸馏水2分钟速溶，可在15分钟左右快速完成封闭操作并能保证与常规封闭剂相同的效果
   ，大幅缩短封闭时间。